그는 배우 송혜교와 함께 유명 교복 광고 모델로 연예계에 데뷔했다. 1997년 KBS2 청소년 드라마 ‘스타트’에 출연하며 연기자의 길을 걷게 된 이은주는 드라마 ‘카이스트’, ‘불새’, 영화 ‘오! 수정’, ‘번지점프를 하다’, ‘연애소설’, ‘태극기 휘날리며’ 등에 출연했다.
2004년 개봉한 영화 ‘주홍글씨’가 그의 마지막 작품이다.
이은주는 다수 드라마와 영화에 출연하며 굵직한 역할과 탄탄한 연기력으로 주목받았다. 특히 2004년 방영한 MBC 드라마 ‘불새’는 이은주가 5년 만에 드라마 복귀를 알린 작품으로 대중의 많은 관심을 받았다. 그 해 이은주는 MBC 연기대상에서 여자 최우수상을 받기도 했다.
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